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微生物检查培养基的灭菌方法

来源: 发布时间:2021-01-09

灭菌是指用物理或化学的方法,杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死。常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类:物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施。化学方法是使用甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理等。

微生物检查培养基常用的灭菌方法主要是湿热灭菌和过滤除菌。

1、湿热灭菌:

蒸汽在冷凝时释放出大量潜能,并且蒸汽具有强大穿透力,蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键,使酶失活,微生物因代谢障碍而死亡。湿热灭菌的效果,取决于致死温度和致死时间。致死温度是杀灭微生物的极限温度。致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。

高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基分装后应立即灭菌,应在当天内完成灭菌工作,不可过夜。消毒时间不宜过长,也不能超过规定的压力范围,否则有机物质就会在高温下分解,失去营养作用,也会使培养基变质、变色,甚至难以凝固。

培养基配制后,应按验证过的高压灭菌程序灭菌。2015版《中国药典》第三次公示稿,1106 非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法中,列出部分培养基的灭菌条件,如下表所示:

培养基名称

灭菌条件

肠道菌增菌液体培养基

加热至100℃ 30分钟,立即冷却

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基

加热煮沸(不能在高压灭菌器中加热)

RV 沙门菌增菌液体培养基

灭菌温度不能超过115℃

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基

加热至沸腾(不能在高压灭菌器中加热)

其他未明确标示灭菌方法的培养基,按供应商标签所示灭菌方法灭菌或按验证过的高压灭菌程序灭菌。

2、过滤除菌:

一些抗生素及有机物等,遇热容易分解,不能与培养基一起进行高温灭菌,而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌,例如含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基。过滤后的溶液要立即加入培养基中,若为液体培养基,可在培养基冷却至30℃时加入;若为固体培养基,必须在培养基凝固之前(50-60℃)加入,振荡使溶液与其他成分混合均匀。

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